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[其他] 為什么用OD260/OD280評定核酸純度

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藥徒
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樓主
發表于 2020-1-20 16:49:39 | 只看該作者 |只看大圖 回帖獎勵 |倒序瀏覽 |閱讀模式
為什么用OD260/OD280評定核酸純度

核酸的最大吸收波長是260nm,這個物理特性為測定核酸溶液濃度提供了基礎。

在波長260nm紫外線下,1 OD值的光密度相當于雙鏈DNA濃度為50μg/ml;單鏈DNA或RNA為40μg/ml;寡核苷酸為20μg/ml。可以此來計算核酸樣品的濃度。

通過測定在260nm和280nm的紫外線吸收值的比值(A260/A280)可以估計核酸的純度。純DNA的比值為1.8,純RNA的比值為2.0。若DNA比值高于1.8,說明制劑中RNA尚未除盡。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白質將導致比值降低。樣品中如混有RNA比值上升。

(紫外吸收檢測DNA濃度與純度2007年11月13日 星期二 11:40目的: 了解紫外吸收檢測DNA濃度與純度的原理,掌握測定方法。原理: 核酸的最大吸收波長為260nm,蛋白質為280nm,在波長260nm時,1OD值相當于

雙鏈DNA
濃度為50μg/ml,單鏈
寡核苷酸
的含量為30μg/ml,可以據此來計算核酸樣品的濃度,還可通過測定在260nm和280nm的OD值的比值(OD260/OD280),估計核酸的純度。純凈DNA的比值為1.8, RNA為2.0。若比值高于1.8說明DNA樣品中的RNA尚未除盡,若樣品中含有酚和蛋白質將導致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干擾。 紫外分光光度法只能用于測定濃度大于0.25μg/ml的核酸溶液,對濃度更小的樣品,可采用熒光分光光度法。試劑與儀器: 提取的質粒DNA,紫外分光光度儀。操作步驟:1)
分光光度計
先用水在260nm和280nm兩個波長下校零。2) 取質粒DNA樣品2μl,用水稀釋100倍,轉入
分光光度計
的石英比色杯中。3) 在260nm和280nm分別讀出樣品光密度值。如果樣品濃度單位為μg/μl,則樣品DNA濃度為OD 值的10倍,即如OD<SUB>260</SUB>=0.1,則樣品濃度即為1μg/μl。4) 若OD<SUB>260</SUB>/OD<SUB>280</SUB>大于1.8,說明仍有RNA,可以考慮用
RNA酶
處理樣品,若小于1.8,說明樣品中含有蛋白質或酚,應再用酚/氯仿抽提,以乙醇沉淀純化DNA。 )

擴展資料


顯示DNA的傳統方法是富爾根(Feulgen)反應,切片先用稀鹽酸處理,DNA經弱酸(1mol/L HCL)水解后,在60℃條件下使DNA分子中脫氧核糖與嘌呤之間的連接打開,脫氧核糖的一端釋放出醛基,并在原位與Schiff試劑反應生成紫紅色產物。

原理同PAS反應,使細胞核DNA顯紫紅色。在此過程中RNA不受影響,故染色具有DNA特異性。準確的溫度和鹽酸濃度,適宜的水解時間是成功的關鍵。水解過度或不足均降低染色強度。

核酸可分為脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)和核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)。

核酸不但是一切生物細胞的基本成分,還對生物體的生長、發育、繁殖、遺傳及變異等重大生命現象起主宰作用。它在生物科學的地位,可用“沒有核酸就沒有生命”這句話來概括。




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藥生
沙發
發表于 2020-1-21 14:27:38 | 只看該作者
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藥徒
板凳
 樓主| 發表于 2020-2-12 11:47:44 | 只看該作者
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藥徒
地板
發表于 昨天 21:21 | 只看該作者
謝謝分享!
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